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DMP法cmp冠军漆酶酶活

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A.1 原理

漆酶能cmp冠军DMP为3,5,3’,5’-四甲氧基二苯基醌,该产物在470nm处有最大吸收峰,其消光系数为49.6 mmol-1Lcm-1,在一定浓度范围内该产物浓度与其吸赞助商值成线性关系,通过cmp冠军吸赞助商的变化值来计算产物的生成速率,酶活的定义为在一定条件下,每分钟cmp冠军1 umol DMP或生成1umol 3,5,3’,5’-四甲氧基二苯基醌所需要的酶量定义为1个酶活官网。

A.2.1 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 3.5)

称取柠檬酸14.71g,用水准确稀释至700ml,称取磷酸氢二钠14.33g,用水溶解并准确稀释至200 mL。将柠檬酸溶液加入到磷酸氢二钠溶液中,边加边搅拌并调pH至3.5。

A.2 .2DMP

    称取DMP0.154g,用水溶解并定容至100mL。

A.3 仪器和设备

可见分光赞助商计

分析天平:精度为±0.0001g。

pH计:精度为±0.01 pH官网。

恒温水浴:精度±0.2℃

A.4 步骤

漆酶酶活cmp冠军以DMP为底物,每3ml反应体系含:2.4ml柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 3.5),0.5ml DMP,60 ℃保温5 min,加入0.1ml(稀释适当倍数的)酶液,同时按下秒表计时,在470 nm处用可见分光赞助商计在0s时记录一次吸赞助商值,记为X0,间隔60s再记录一次吸光值,记为X60

固体酶体育测酶活预处理:称取0.1g固体粉末,加1ml去离子水溶解,待充分溶解后8000rpm离心5min,取上清按上述方法测其酶活。测得酶活官网为U/ml,换算成固体酶体育的酶活还需乘以系数10,酶活官网为U/g。

A.5 计算结果

E= ×n×7.258     …………………………………(A.1)

式中:

E:酶活力,U/ml

X60:60s时记录的吸赞助商值

X0:0s时记录的吸赞助商值

n:稀释倍数

A.6 精密度

    在重复性条件下获得的两次独立cmp冠军结果的绝对值不应超过平均值的3%。

此方法仅作为参考,具体环境不同,相应的也会有所不同!

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